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氨基酸測(cè)定儀的特點(diǎn)與原理

更新時(shí)間:2023-08-18點(diǎn)擊次數(shù):1430
  一、基本原理為流動(dòng)相(緩沖溶液)推動(dòng)氨基酸混合物流經(jīng)裝有陽(yáng)離子交換樹脂的色譜柱,各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換,當(dāng)用不同的pH緩沖溶液進(jìn)行洗脫時(shí)因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離,分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng),生成紫色化合物或黃色化合物,用可見光檢測(cè)器檢測(cè)其在570nm、440nm的吸光度。
 
  二、特點(diǎn):用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前,必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸。它是基于陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。
 
  三、作用過(guò)程:通常細(xì)分為兩種系統(tǒng):蛋白水解分析系統(tǒng)(鈉鹽系統(tǒng))和游離氨基酸分析系統(tǒng)(鋰鹽系統(tǒng)),利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰進(jìn)行梯度洗脫。其中鈉鹽系統(tǒng)一次最多分析約25種氨基酸,速度較快,基線平直度好;鋰鹽系統(tǒng)一次最多分析約50種氨基酸,速度較慢,基線一般不如鈉鹽系統(tǒng)好。
 
  四、分析效果:從目前已知的氨基酸分析方法比較來(lái)看,除靈敏度(低檢測(cè)限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:<0.5pmol;氨基酸分析儀:<10pmol),其他如分離度、重現(xiàn)性、操作簡(jiǎn)便性、運(yùn)行成本等方面,都優(yōu)于其他分析方法。
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